2021-08-02
1、樣本準備過程中防止蛋白質降解和保留翻譯后修飾樣本準備過程中，細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應在冰上進行，并預先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時，選擇所要檢測位點的磷酸化抗體至關重要。磷酸化都會使蛋白質的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導磷酸化課題設計可能需要在收獲前刺激細胞，以確保蛋白質被磷酸化。例如，在...
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2021-08-02
蛋白轉印的方法蛋白轉印可選擇傳統濕轉、半干轉或快速半干轉方法。濕轉系統：適用于大多數各種分子量的常規蛋白轉印。轉印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉印緩沖液的槽中。半干轉系統：凝膠和膜被夾在預先潤濕緩沖液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半干轉系統的安裝使用比濕轉簡單。快速轉印系統：快速轉印系統是最近發展出來的技術，使用專用設備、專用濾紙及專用緩沖液來快速有效地轉印蛋白。通常濾紙和濕潤的膜預先放在一次性包裝中，簡化了轉印“三明治”的組裝。轉印緩沖液轉印緩沖液包含強導電性化學緩沖試劑...
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2021-07-30
中山大學藥學院于7月27日發布通報，該院2021年7月27日發生一起實驗安全事故，實驗=室在清理通風柜時發現之前畢業生遺留在燒瓶內的未知白色固體，一博士研究生用水沖洗時發生炸裂，炸裂產生的玻璃碎片刺破該生手臂動脈血管，送醫救治傷情得到控制，無生命危險。與實驗室負責老師溝通分析，導致炸裂的未知白色固體中可能含有氫化鈉或氫化鈣，遇水發生劇烈反應而炸裂。實驗室的瓶瓶罐罐清洗是科研工作者最日常的工作，但是，如果你并不確定瓶內裝的是什么東西，千萬不要隨意就拿去清洗！有些化學品遇水會發生...
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2021-07-29
研究人員發現，盡管大腦通過中腦產生5-羥色胺的神經元來調節快感和饑餓感的進食，但每種進食方式都是由自己獨立的電路連接的，不影響其他類型的進食方式。美國疾病控制與預防中心(CentersforDiseaseControlａndPrevention)的數據顯示，無論是由饑餓還是愉悅引起的暴飲暴食，通常都會導致肥胖。美國約42%的成年人都患有肥胖癥。一個由貝勒醫學院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人員領導的國際研究小組在動物模型上研究了大腦是如何調節饑餓或其...
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2021-07-29
基本原理：外源目的DNA與載體分子的連接稱為DNA重組，重組的DNA稱為重組體或重組子。研究中需要克隆或表達的基因為外源DNA，載體是指能夠攜帶外源基因進入受體細胞，并在其中進行擴增或誘導外源基因表達的工具，其中質粒載體最為常用。質粒是獨立于細菌染色體外具有自我復制的DNA分子。所有的質粒都有復制子、選擇性標志和多克隆位點3個共同的特性。質粒載體的選擇包括載體的大小、載體拷貝數、多接頭以及篩選插入片段的能力，pcDNA3.1（+/-）是比較常用的真核表達載體。基本步驟：1、目...
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2021-07-29
CCK8全稱CellCountingKit-8，是一種基于WST-8（化學名為2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽）的應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其工作原理類似于MTT，在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8可以被線粒體內的脫氧酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的數量有關。CCK8法在藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性實驗、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢...
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2021-07-28
基本原理細胞凍存時保存細胞的最基本方法，當不加保護劑直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水會形成冰晶，從而引起細胞死亡。因此，正常情況下凍存細胞，通常會向培養液中加入保護劑，使用逐步降低溫度的方法，以減少凍存過程中細胞內冰晶形成、保護細胞。注意事項1、凍存細胞選擇細胞增殖旺盛、情況穩定、無污染、處于對數生長期的細胞。2、實驗操作過程必須遵循無菌操作。3、細胞凍存液的配方應根據細胞的類型進行調整，摸索對應細胞最適的配方。4、細胞凍存過程，降溫速率要小，遵循慢凍原則，可借助程序降溫...
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